伊莎貝拉一世(西班牙語:Isabel I la Católica，1451年4月22日-1504年11月26日)是卡斯蒂利亞的女王。她與堂弟及丈夫費迪南二世(1452年3月10日-1516年1月23日)完成了收復失地運動，爲日後他們的外孫查理五世統一西班牙奠定了基礎。
伊莎貝拉一世是一位精力充沛、才幹非凡的君主。她做出過一套完整的關鍵性決策，這些決策在好幾個世紀中都對西班牙和拉丁美洲有着深刻的影響，至今對更多的人仍有着間接的影響。她還是克里斯托弗·哥倫布橫渡大西洋的資助人。
伊莎貝拉於1451年出生於卡斯提爾王國(現在是西班牙的一部分)的牧歌鎮。她小時候受過嚴格的宗教訓練，是一個非常虔誠的天主教教徒。她的同父異母長兄恩裏克四世從1454年到1474年死去時一直就任卡斯提爾國王。那時候西班牙尚未統一，主要分爲幾個王國:卡斯提爾、阿拉貢、格拉那達、納瓦拉等。卡斯提爾的面積最大，阿拉貢位於今日西班牙東北部，格拉那達位於南部，納瓦拉在北方。
十五世紀六十年代末期，伊莎貝拉是繼承卡斯提爾王位的候選人，又是歐洲最富有的女子，因此許多王子都向她求愛。她的同父異母兄長恩裏克四世希望她嫁給葡萄牙國王。但是1469年年滿十八歲的伊莎貝拉逃出家門，不顧恩裏克國王的反對，與阿拉貢王位的繼承人斐迪南結了婚。伊莎貝拉這一違命舉動激怒了恩裏克，他於是便指定他的女兒胡安娜爲他的繼承人。但是1474年當恩裏剋死去時，伊莎貝拉宣佈繼承卡斯提爾王位，這遭到胡安娜支持者的反對，於是爆發了一場內戰。1479年2月，伊莎貝拉的武裝力量取得了勝利。同年阿拉貢國王胡安二世(1458-1479年)死去，斐迪南成爲阿拉貢國王稱斐迪南二世(1479–1516年在位)。從此斐迪南和伊莎貝拉共同統治卡斯提爾和阿拉貢的大片江山。
伊莎貝拉一世丈夫斐迪南二世機智敏銳，才幹與她不相上下。他們的大多數重要決策通常是根據伊莎貝拉的建議，通過與斐迪南商議後才做出的，而且是通過與斐迪南的密切合作纔得到貫徹執行。
從表面上來看，阿拉貢和卡斯提爾兩個王國仍是各自獨立，兩國的大多行政機構也仍然各自保持獨立。但是實際上斐迪南二世和伊莎貝拉一世所有的決策都是倆人共同制定的，夫妻倆皆盡全力，默契配合，共當西班牙君主。在他倆共同統治的二十五年中，其基本政策是要創建一個統一的西班牙王國，這個王國由一個強大的君主政體統治。他倆的首要目標之一是征服格拉納達王國--伊比利亞半島上仍受伊斯蘭教統治的唯一地區。征服戰於1481年開始，到1492年2月結束，斐迪南和伊莎貝拉取得了收復失地運動的最終勝利。征服了格拉納達等國，西班牙佔據的領土就幾乎和它今日的領土一樣多。納瓦拉王國在伊莎貝拉死後，於1512年被吞併。
斐迪南和伊莎貝拉在其統治初期創建了西班牙宗教裁判所。該法庭融法官、陪審團、起訴律師和警方調查人的權力爲一體，以其刑罰手段兇暴殘忍和審理程序粗糙不平而臭名遠揚。嫌疑犯很少有機會或者根本沒有機會反駁對自己的控告。他們無法知道控告自己的全部證據，甚至連原告人的名字也無法知道。嫌疑犯若否認對自己的指控常常要遭到酷刑拷打，直到承認爲止。根據一項保守的估計，至少有兩千人被燒死在火柱刑上，受到刑罰比這輕的人數要比這個數目多許多倍。
西班牙宗教裁判所的頭目是一個極端狂熱的僧侶托馬斯·湯戈馬達，他是伊莎貝拉的私人仟悔神父。宗教裁判所雖然得到了教皇的認可，但是實際上是在西班牙國王的控制之下，宗教裁判所一是用來建立宗教統一，二是用來鎮壓國王的政敵。在英國，封建領主總是保持足夠的勢力以限制國王的權力。西班牙的封建主也曾經有權有勢;但是西班牙國王現在可以利用宗教裁判所爲武器來鎮壓公然反抗的封建主，由此來建立一箇中央集權的專制君主國，也可以利用它來進一步控制西班牙牧師。
但是宗教裁判所的主要對象是在宗教上有離經叛道行徑的嫌疑分子，特別是一些猶太教徒和伊斯蘭教徒，他們名義上已經改信天主教，但在暗地裏卻在繼續奉行自己先前的宗教。
起初宗教裁判所並沒有把矛頭指向那些把自己的信仰公開出來的猶太教徒，但是1492年在狂熱的湯戈馬達的極力主張下，斐迪南和伊莎貝拉簽署了一項佈告，命令所有西班牙的猶太教徒如果不改信天主教，就在四個月內離開西班牙，並且不允許攜帶財產出境。這道驅逐令對大約二十萬猶太教徒是一個大災難，許多人未來得及找到一個安全的避難之所便橫遭殺身之禍。西班牙國中很大一部分最勤勞、最精明的商人和手藝人流離失所，因此西班牙在經濟上遭受了一次嚴重的打擊。
當拉格納達投降時，雙方簽訂的和平協議規定居住在西班牙的伊斯蘭教徒可以繼續奉行自己的宗教。但是在事實上，西班牙政府不久便踐踏了這項協議。因此摩爾人奮起反抗，但卻遭致失敗。1502年所有住在西班牙的伊斯蘭教徒都被迫做出選擇，不是改信天主教就是流亡國外，同樣的選擇在十年前就擺在了猶太教徒面前。
伊莎貝拉雖然是個虔誠的天主教徒，但是卻從來不允許讓她的正統觀念干擾她的西班牙民族主義。爲了確保西班牙天主教在西班牙君主制而不是教皇的控制之下，她和斐迪南努力鬥爭，取得了成功。這就是十六世紀的宗教改革在西班牙未取得任何進展的理由之一。
當然，在伊莎貝拉統治期間最著名的事件是克里斯托弗·哥倫布發現了新大陸，這個事件也發生在極不平凡的1492年。哥倫布探險是由卡斯提爾王國資助的，但是有關伊莎貝拉不得不典當她的珠寶來資助這次探險的說法是不真實的。
伊莎貝拉於1504年去世。她一生有四個女兒和一個兒子。兒子胡安於1479年早夭。另一個女兒，阿拉貢的凱瑟琳(Catherine of Aragon)是英國國王亨利八世的第一任王后，英格蘭女王瑪麗一世(血腥瑪麗)的母親。她的四個女兒中最著名的是胡安娜(瘋女胡安娜)。斐迪南和伊莎貝拉把胡安娜許配給菲利普一世(美男子)，他是奧地利哈布斯堡王朝皇帝之子，也是勃艮第公國的繼承人。這兩位不尋常的王朝聯姻，使得伊莎貝拉的外孫查理五世皇帝繼承了歐洲歷史上最大王國之一的王位，他還被當選爲神聖羅馬帝國皇帝，是當時財富最多、勢力最大的歐洲帝王，開創了西班牙哈布斯堡王朝。他在名義上或實際上統治過的領土包括現今的(西班牙、德國、荷蘭、比利時、奧地利、瑞士、大部分意大利、部分法國、捷克斯洛伐克、波蘭、匈牙利和南斯拉夫)，此外還有西半球的一個很大地區。查理五世和菲利普二世都是狂熱的天主教徒，他們在長年的統治期間，靠掠奪大陸的財富來資助反對北歐新教國家的戰爭。因此由斐迪南和伊莎貝拉一世安排的王朝聯姻幾乎在她倆死後一百年當中都對歐洲的歷史產生着影響。
